<em id="dz3zt"><form id="dz3zt"><th id="dz3zt"></th></form></em>


      <form id="dz3zt"><nobr id="dz3zt"><nobr id="dz3zt"></nobr></nobr></form>

      GLP條件下做好動物解剖和組織固定的心得體會

      2017-03-30 作者:盧婷婷

      毒性病理學是評價中藥天然藥、化學藥和生物技術藥物毒性和危險因素的學科,是毒理學的重要組成部分。在病理學評價中減少誤差,充分揭示和反映毒性所致的病理學改變,要求毒性病理學評價使用規范的實驗方法和評定標準。其中很重要的一步是實驗動物的解剖和組織固定。

      一個標準的動物解剖流程包括:(1)查看最近一次的臨床觀察記錄,確認解剖中的注意事項;(2)確認動物ID(耳標、紋身)和動物標簽,確認剖檢記錄表;(3)檢查體表、眼、耳、口腔、鼻孔、肛門和生殖器周圍有無異常;(4)檢查皮下組織包括淋巴結有無異常;(5)根據方案和SOP摘取相應的臟器并進行大體觀察。

      解剖過程中的注意事項:(1)所有方案要求檢查的臟器都需摘取并固定,尤其注意小的臟器需要放在包埋盒中固定,以防丟失;(2)防止解剖過程中的人為損傷,以免因為人為損傷會導致病理診斷困難甚至無法診斷。常見的人為損傷包括:(1)氣體麻醉如CO2麻醉導致肺臟和胸腺急性出血;(2)解剖過程中器械使用不當及過度牽拉、擠壓導致的機械損傷(如圖所示,手觸摸過的腸粘膜就可能出現組織病理學的異常改變);(3)解剖時間過長,導致組織臟器自溶(特別是消化酶含量較多的臟器)或胃腸粘膜層脫落等(4)用不合適的固定液灌注臟器等。


      為防止細菌腐蝕和組織自溶,保存細胞固有物質,凝固或沉淀細胞內或組織液、糖原等,使細胞或組織基本上保持與生活時的物質一樣,并使組織硬化,便于后續組織取材、包埋及切片等工作有序進行,就都必須對組織進行及時和有效的固定。影響組織固定的因素主要有以下幾點:(1)組織的大小。如福爾馬林固定液24小時滲透厚度小于5 mm,因此解剖過程中,大的臟器要盡可能地切開后固定;(2)固定液體積。固定液體積至少為組織體積的10倍;(3)固定的時間。根據固定液的性質和組織的用途,選擇合適的固定時間,特別是做免疫用途的組織,根據抗原保存的條件控制好固定時間,一般為6 ~ 48 h;(4)固定液的選擇。例如眼球固定液的選擇,如供試品對視網膜有影響,可以選擇Davidson’s固定液,如供試品對晶狀體有影響可以選擇戊二醛進行固定。(5)pH值。雖然固定液的pH值對光鏡檢查的切片沒有大的影響,但如10 % NBF(中性福爾馬林)的pH值低于6,就會產生福爾馬林色素,對于免疫用組織,固定液的pH值需控制在7.2 ~ 7.4之間



      蘇州華測
      500万购彩